PCR中如何计算引物的浓度？？

杜马盖地关羽 2021-08-15 05:01

开发者_如何学C
根据国际统一标准: 1OD引物干粉约为33微克； 引物的摩尔数(μmol) =质量数 / 引物分子量 =(OD数×33)/引物分子量

如您拿到1管2 OD的引物, 分子量是6565.3， 引物的摩尔数(μmol) =（2×33）/6565.3 ≈0.010μmol=10 nmol

若您需要溶解为10μM (=10pmol/μl)的溶液，只需加入1 ml无菌ddH2O或10 mM pH7.5 TE缓冲液充分溶解即可。

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走在地平线上 2021开发者_JAVA百科-08-15 05:02

方法如下：
引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 溶解前需要核对合成报告单和引物标签上的引物OD数是否一致。一般情况下，将引物的浓度配制成50pmol/ul，加水的体积（微升）按下列方式计算：V (微升)= OD数（乘）33 *（乘）（乘）20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。
注意：1 OD260= 33 ug/ml.

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乔微博 2021-08-15 05:15

一般PCR反应中的引物终浓度为0.2-1.0μmol/L。引物过多会产生错误引导或产生引物二聚体, 过低则降低产量。利用紫外分光光度计, 可精确计算引物浓度, 在1cm光程比色杯中,260nm下,引开发者_JAVA技巧物浓度可按下式计算：
X mol/L＝ OD260/ A(16000)+C(70000)+G(12000)+T(9600)
X: 引物摩尔浓度,A、C、G、T: 引物中4种不同碱基个数。

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wuxiansheng 开发者_运维知识库 2021-08-15 05:22

可以将引物的浓度配制成50pmol/ul，加水的体积（微升）按下列方式计算：V (微升)= OD数×33 ×20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。

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