核酸检测技术有哪些？？

360U3207888927 2021-08-01 06:01

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有的，现在英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增就是可以替代PCR技术的核酸检测方法。重组酶聚合酶扩增英文全称是Recombinase Polymerase Amplification，简写为RPA。实验室使用的PCR仪实际上就是一个温度控制器，控制环境温度适合于变性、退火、延伸。而RPA技术可以检测单核酸，而且检测时间快速，没有变性过程。
RPA反应的过程中有三种酶：能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温条件下也有活性，所以RPA仪不需要额外的控温部件，相比于PCR仪更容易携带。
RPA的作用原理是将重组酶与引物结合形成蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。DNA在引物定位同源序列，发生链交换反应后启动合成，模板上的目标区域被指数式扩增。被替换的DNA链与单链DNA结合蛋白结合紧密，防止进一步替换。RPA反应十分迅速，不超过十分种。
除了便携性和快捷性，RPA检测还具有很高的灵敏度很高，能够扩增痕量的核酸（尤其是DNA）模板到可以检出的水平，一般从单个模板分子能得到大约1012的扩增产物。此外， RPA不需要复杂的样品处理，也不需要提取核酸，可以不受场地限制进行实地检测。RPA检测不限于DNA，也可以直接RNA，不需要将RNA逆转录为cDNA，大大简化了操作步骤。
但是RPA引物比一般PCR引物长，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度。

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