动物转基因具体怎么操作？？

三言两句 2021-08-07 19:57

除了显微注射法外，常用的还有病毒感染、精子融合、电穿孔、基因枪等方法。
1. 显微注射法。这是最常用且成功率较高的方法，首先需要采集动物的受精卵，然后将DNA溶液显微镜下注射入受精卵中。然后选注射成功的受精卵移入妊娠雌性的子宫中，待妊娠完成出生后鉴定转基因表达情况。
2.反转录病毒感染法。反转录病毒具有侵入宿主细胞并整合于细胞染色体DNA的能力。将外源基因DNA插入反转录病毒载体，通过辅助细胞包装成高感染度的病毒颗粒，感染胚胎后，将感染的桑椹期胚胎细胞导入子宫，可发育成携带外源基因的子代动物。该法整合率较高，目的基因不易破坏，多是单拷贝、单位点整合，适合于难以观察到原核的禽类受精卵。由于病毒衣壳大小的限制，目的基因不宜超过10kb，否则影响活性和稳定。此外，病毒DNA可能影响外源基因在宿主动物的表达。
3. 电脉冲法（electroporation）又称电穿孔法，是将供体DNA与受体细胞充分混匀，在外界的高电压短脉冲下改变细胞膜结构，使细胞膜产生瞬间可逆性电穿孔，从而使一定大小的DNA可以通过细胞膜进入细胞，运送到细胞核。目前在动物中电脉冲法主要用来转化胚胎干细胞。
4. 精子导入法。利用精子作为外源基因载体，借助受精作用把外源綦因导人受精卵，整合到受精卵的基因组中，称之为精开发者_高级运维子载体导入法，是构建转基因动物的一种新尝试。该法简单、方便，依靠生理受带过程，免去了对原核的损伤。但在实践中成功率较低，对精子是否可作为外源DNA的载体也存在争论。目前这_技术尚处在探索阶段。该法可以将人工授精、体外受精与转

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