什么是OLA/PCR法？有人了解的么？？

yifa****_1219 开发者_如何学Go 2021-08-11 22:57

即寡聚核酸连接酶链反应与聚合酶链反应结合的方法,是2003年最新商业化的高通量SNP分型方法,目前全球已有两家公司推出基于OLA/PCR方法的商业化平台:即AppliedBiosystems的3730/3100基因分析仪平台和Illumina公司的光纤杂交芯片系统。该方法的优点是高通量、低成本,每天可做40万-100万个SNP基因分型,同时其准确性和成功率很高,可以在一个反应孔中做48-100个基因分型,因而也比较节约样本DNA。其主要原理是:(1)OLA反应,每一个SNP需要设计3条40bp长的寡核酸探针,与模板DNA杂交,完全配对的探针才能被连接酶连接。通常OLA反应可以在1个反应管中同时进行48-100个SNPs位点的连接反应。(2)PCR反应,用于OLA反应的寡核酸探针两端带有相同的约20bp长的PCR引物结合序列,因此通过采用带生物素标记的通用引物PCR扩增后,OLA连接产物被大量扩增,且扩增产物一端带上生物素标记。(3)杂交,带亲和素(Avidin)的384孔反应板将OLA/PCR产物结合后,加长度不同或荧光颜色不同的杂交序列杂交,或与光纤芯片上的探针杂交。(4)电泳分析杂交序列或芯片分析杂交结果。OLA/PCR方法是目前国际人类单倍体型计划参与研究机构一致看好的技术平台,该平台比较适合于以下提到的全基因组水平的关联分析。

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