有了解SNPs的基因分型方法中的单碱基延伸法的么？？
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2021-08-12 08:43
开发者_StackOverflow中文版
单碱基延伸法基本原理与直接测序方法相同,从本质上讲是测SNP位点一个碱基的序列,所以也被称作Mini-Sequencing。该方法目前已经在多种仪器平台上得到应用,包括:毛细管DNA测序仪,飞行时间质谱仪,偏振光酶标仪。该方法的优点是可以允许3-10个SNP位点在一个反应管中分型,从而降低了分析成本。缺点是实验步骤与测序一样多,在做多重分析时往往成功率降低,需要优化条件。通量是每天2万-20万个分型。
荷花桔梗在夏季 开发者_开发问答 2021-08-12 08:44
楼主所说的单碱基延伸法，是ABI公司的SNaPshot方法，原理类似于Sanger测序法，我们首先通过特异性的PCR富集出包含目的SNP的目标片段，纯化完引物，单链核苷酸后，进行延伸反应，SNaPshot Kit中含有许多荧光标记的ddNTP，我们设计出一条紧挨着SNP位点的延伸引物，这样在反应中，他只会延伸出一个碱基（ddNTP会终止延伸反应），这样延伸出的单链核苷酸片段带有了荧光，在毛细管电泳中可以在对应的位置出现对应的颜色峰，纯合子就是一道峰，而杂合子则是两个峰。
单碱基延伸法基本原理与直接测序方法相同,从本质上讲是测SNP位点一个碱基的序列,所以也被称作Mini-Sequencing。该方法目前已经在多种仪器平台上得到应用,包括:毛细管DNA测序仪,飞行时间质谱仪,偏振光酶标仪。该方法的优点是可以允许3-10个SNP位点在一个反应管中分型,从而降低了分析成本。缺点是实验步骤与测序一样多,在做多重分析时往往成功率降低,需要优化条件。通量是每天2万-20万个分型。
荷花桔梗在夏季 开发者_开发问答 2021-08-12 08:44
楼主所说的单碱基延伸法，是ABI公司的SNaPshot方法，原理类似于Sanger测序法，我们首先通过特异性的PCR富集出包含目的SNP的目标片段，纯化完引物，单链核苷酸后，进行延伸反应，SNaPshot Kit中含有许多荧光标记的ddNTP，我们设计出一条紧挨着SNP位点的延伸引物，这样在反应中，他只会延伸出一个碱基（ddNTP会终止延伸反应），这样延伸出的单链核苷酸片段带有了荧光，在毛细管电泳中可以在对应的位置出现对应的颜色峰，纯合子就是一道峰，而杂合子则是两个峰。
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