核酸适体筛选技术的筛选步骤是怎样的？？

ty_北海无冰1 2021-08-28 13:06

开发者_StackOverflow中文版
（1）运用分子生物学技术，人工设计并合成一个库容量为1015-1018的随机寡核苷酸文库，在特定的缓冲液体系和适宜的温度下（一般为20-35℃）与靶分子混合孵育，形成靶标-核酸适体复合物；
（2）通过滤膜过滤、亲和层析、磁珠分离、毛细管电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等特定方法分离结合与未结合靶标的核酸序列；
（3）反筛选与靶分子结合的核酸序列，以排除掉非特异性结合的核酸序列；
（4）对获得的特异性结合靶标的核酸序列进行PCR扩增生成次级文库，与原靶标分子进入下一轮筛选。
（5）对筛选得到的核酸适体进行克隆和测序，并进行生物活性、识别位点与分子结构（一级结构和二级结构）分析，与靶分子特异性强、亲和力高的核酸适体即可用于各种研究工作。

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李积成 2021-08-28 13:32

核酸适体筛选技术的筛选步骤主要包括:①利用分子生物学技术构建人工合成的单链随机寡核苷酸文开发者_运维知识库库,其随机序列长度为20～100个碱基;②将靶点分子与随机寡核苷酸文库一起温育,保留与之结合的寡核苷酸;③结合PCR体外扩增技术,经过多轮筛选,使能与靶点分子特异结合的寡核苷酸序列得到富集,最终筛选得到核酸适体。

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