原核生物转录组测序原理及具体操作步骤？？

heisenbergstr1 2021-11-15 22:30

原核生物转录组测序原理是利用第二代高通量测序技术对原核生物的转录本（mRNA和非编码RNA）进行测序，全面快速地获取特定微生物在特定状态下的所有转录本的信息。通过转录组测序研究可以揭示微生物不同表现型形成的分子调控机制。
原核生物的mRNA一般为多顺反子，直接拼接效果较差。若没有参考基因组，需要先做一个基因组扫描图来辅助后期转录组分析。原核生物mRNA没有Poly A结构，无法用Oligo dT纯化mRNA，开发者_开发问答必须通过去除总RNA中的核糖体RNA来纯化得到mRNA。
链特异性转录组合成cDNA第二条链时，加入的dNTPs试剂中用dUTP代替dTTP，使cDNA第二链中仅包含A/U/T/G。在PCR扩增前，用UNG酶将cDNA第二链消化，从而使文库中仅包含cDNA第一链。

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