目前应用于遗传性耳聋的常规基因检测手段有哪些？？？
ty_122344243
2021-11-20 04:56
楼上已经答复的很完整了。最近的研究表明在中国相当一部分遗传性耳聋仅由为数不多的基因突变引起，以下就是我国遗传性耳聋患者所涉及的主要基因：
GJB2基因
GJB2基因突变导致的耳聋为语前、双侧、对称性耳聋，听力损失程度变异较大，可由轻度到极重度，但多数为重度或极重度耳聋，GJB2基因和先天性聋有着密切关系，中国先天性聋患者中携带有GJB2基因突变的约占20%。GJB2基因突变位点有很多，在亚洲人种中最常见的为235delC，在已完成的1680例非综合征性耳聋患者GJB2 235delc突变的筛查中发现，纯合突变148例，杂合突变157例，其中纯合突变检出率为8.81%。杂合突变检出率为9.35%，总检出率达18.16%。调查结果表明，GJB2 235delC缺失在中国耳聋入群中占有相当大的比例。
线粒体DNA（mtDNA）基因
线敉体基因突变（发生频率最高的为A1555G突变）与链霉素、庆大霉素、卡那霉素等氨基糖甙类药物引起的药物性耳聋有着密切关系。在已完成的2016例非综合征性耳聋线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变筛查中，发现阳性病例57例，检出率为2.83%[13]。更为重要的是对其中有完整资料的52个家系的调查显示，每发现一个阳性患者，平均可以在其家系内发现发现3个耳聋患者，和10个携带A1555G突变的正常听力者，对于这一部分人禁用氨基糖甙类药物，可以有效避免药物性耳聋的发生。
PDS基因
PDS基因又名SLC26A4，在内淋巴管和内淋巴囊、Corti氏器外沟细胞、甲状腺中高表达，基因突变与弧立的大前庭水管综合征（LVAS）和Pendred氏综合征（前庭水管扩大或伴内耳畸形、神经性聋和甲状腺肿）有密切关系，临床上表现为先天性或后天性耳聋，耳聋发生或加重与外伤、感冒有关。对安阳市特教学校151例聋哑学生SLC26A4基因突变热点区域序列分析结果显示，31.79%患者检测到了SLC26A4基因的突变，包括双等位基因突变者26例（17.22%），单等位基因突变者22例（14.57%）。这3种基因引起的遗传性耳聋约占整个遗传性耳聋的80%。此外，GJB3的突变也能导致常染色体显性和隐性非综合征性耳聋，被认为与高频听力下降有关。该基因也是在我国本土上克隆的第一个遗传疾病基因，是我国克隆遗传性疾病基因零的开发者_StackOverflow社区突破。
亚洲小强 2021-11-20 05:05
华大基因临床检验中心利用质谱平台进行耳聋基因检测，快速准确的检测中国耳聋人群常见的3个基因突变热点，也可以根据需要加测其他位点。与基因芯片方法比较，价格更低，在新生儿听力筛查中应用前景广阔，可以及早发现听障儿童，及早诊断、干预。此外，该技术还可用于耳聋病人的病因诊断，为有耳聋患者或亲属的家庭提供生育指导，也适用于正常听力人群的婚前、孕前、产前筛查等。
遗传性耳聋基因检测的常规检测手段
1直接测序
直接测序（direct sequencing，DS）是将聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增产物纯化、变性后，在测序仪上进行测序，为寻找突变的金标准。但其仪器设备昂贵，且操作复杂、耗时较长。此外，杂合突变、胶压缩、GC富集区的存在等问题使得很难通过一次测序获得精确的数据。
2限制酶切指纹-单链构象多态性分析：限制性核酸内切酶切割目标基因的PCR扩增产物，琼脂糖凝胶电泳检测梅切产物，根据异常构象带进行目标基因有无突变的判断。该方法最主要的问题是不能检测到所有的突变，由各实验室报道的突变检出率冲99%到35%不等。同时该方法要求多次摸索条件，如电泳温度，胶中甘油浓度以及胶联度等均可影响检测的灵敏度。此外，该方法也不能确定突变的精确位置。
3 限制性片段长度多态性分析：是用特定的限制性内切酶水解目标基因的PCR扩增产物，然后分析酶解产物的电泳图谱特征，根据与正常对照的比对结果来判断待检样品是否存在某个基因突变，其弱点操作繁琐，检出率低，因为并非所有的基因突变都恰好位于某个内切酶的识别区。
4 变性高效液相色谱分析： 此技术是一项在单链构象多态性分析和变性梯度凝胶电泳基础上发展起来的新的杂合双链突变检测技术。它能对大批量PCR扩增产物进行筛查，其在检测大量致病基因的不同序列方面显示出高度的敏感性，适合做快速的基因筛查。目前该技术主要用来检测200~300bp大小的DNA片段，长的DNA片段的检测尚未见报道。
5基因芯片
基因芯片是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，然后与待测的标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交，再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。基因芯片技术因其具有微型化、集约化和标准化的特点，在感染性疾病、遗传性疾病、重症传染病和恶性肿瘤等疾病的临床诊断方面具有独特的优势，可将对应于突变热点的寡核苷酸探针合成点或点加于DNA芯开发者_开发百科片上，通过一次杂交完成对待测样品多种突变可能性的筛查，实现对疾病的高效快速诊断。
基因检测芯片技术具有高效率、高通量等特点，由博奥生物和301医院联合推出的耳聋检测基因芯片已经在国内率先取得国家食品药品监督管理局医疗器械证书，将有助于改变我国许多地区遗传性耳聋缺乏早期诊断的状况。可以提供从孕前、产前到出生的基因检测，帮助生育父母及时获知新生命的遗传信息并采取措施，降低新生儿患遗传性耳聋的概率。
重点介绍下第六种
6第六种耳聋基因检测方法——飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）
质谱方法检测基因是首先进行PCR扩增目的片断区域，然后加入多对特异性引物，进行单碱基延伸，再将单碱基延伸产物纯化后打质谱，根据不同引物扩增产物的质荷比不同，判断有无碱基突变。
详见：http://blog.sciencenet.cn/blog-623020-483407.html
楼上已经答复的很完整了。最近的研究表明在中国相当一部分遗传性耳聋仅由为数不多的基因突变引起，以下就是我国遗传性耳聋患者所涉及的主要基因：
GJB2基因
GJB2基因突变导致的耳聋为语前、双侧、对称性耳聋，听力损失程度变异较大，可由轻度到极重度，但多数为重度或极重度耳聋，GJB2基因和先天性聋有着密切关系，中国先天性聋患者中携带有GJB2基因突变的约占20%。GJB2基因突变位点有很多，在亚洲人种中最常见的为235delC，在已完成的1680例非综合征性耳聋患者GJB2 235delc突变的筛查中发现，纯合突变148例，杂合突变157例，其中纯合突变检出率为8.81%。杂合突变检出率为9.35%，总检出率达18.16%。调查结果表明，GJB2 235delC缺失在中国耳聋入群中占有相当大的比例。
线粒体DNA（mtDNA）基因
线敉体基因突变（发生频率最高的为A1555G突变）与链霉素、庆大霉素、卡那霉素等氨基糖甙类药物引起的药物性耳聋有着密切关系。在已完成的2016例非综合征性耳聋线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变筛查中，发现阳性病例57例，检出率为2.83%[13]。更为重要的是对其中有完整资料的52个家系的调查显示，每发现一个阳性患者，平均可以在其家系内发现发现3个耳聋患者，和10个携带A1555G突变的正常听力者，对于这一部分人禁用氨基糖甙类药物，可以有效避免药物性耳聋的发生。
PDS基因
PDS基因又名SLC26A4，在内淋巴管和内淋巴囊、Corti氏器外沟细胞、甲状腺中高表达，基因突变与弧立的大前庭水管综合征（LVAS）和Pendred氏综合征（前庭水管扩大或伴内耳畸形、神经性聋和甲状腺肿）有密切关系，临床上表现为先天性或后天性耳聋，耳聋发生或加重与外伤、感冒有关。对安阳市特教学校151例聋哑学生SLC26A4基因突变热点区域序列分析结果显示，31.79%患者检测到了SLC26A4基因的突变，包括双等位基因突变者26例（17.22%），单等位基因突变者22例（14.57%）。这3种基因引起的遗传性耳聋约占整个遗传性耳聋的80%。此外，GJB3的突变也能导致常染色体显性和隐性非综合征性耳聋，被认为与高频听力下降有关。该基因也是在我国本土上克隆的第一个遗传疾病基因，是我国克隆遗传性疾病基因零的开发者_StackOverflow社区突破。
亚洲小强 2021-11-20 05:05
华大基因临床检验中心利用质谱平台进行耳聋基因检测，快速准确的检测中国耳聋人群常见的3个基因突变热点，也可以根据需要加测其他位点。与基因芯片方法比较，价格更低，在新生儿听力筛查中应用前景广阔，可以及早发现听障儿童，及早诊断、干预。此外，该技术还可用于耳聋病人的病因诊断，为有耳聋患者或亲属的家庭提供生育指导，也适用于正常听力人群的婚前、孕前、产前筛查等。
遗传性耳聋基因检测的常规检测手段
1直接测序
直接测序（direct sequencing，DS）是将聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增产物纯化、变性后，在测序仪上进行测序，为寻找突变的金标准。但其仪器设备昂贵，且操作复杂、耗时较长。此外，杂合突变、胶压缩、GC富集区的存在等问题使得很难通过一次测序获得精确的数据。
2限制酶切指纹-单链构象多态性分析：限制性核酸内切酶切割目标基因的PCR扩增产物，琼脂糖凝胶电泳检测梅切产物，根据异常构象带进行目标基因有无突变的判断。该方法最主要的问题是不能检测到所有的突变，由各实验室报道的突变检出率冲99%到35%不等。同时该方法要求多次摸索条件，如电泳温度，胶中甘油浓度以及胶联度等均可影响检测的灵敏度。此外，该方法也不能确定突变的精确位置。
3 限制性片段长度多态性分析：是用特定的限制性内切酶水解目标基因的PCR扩增产物，然后分析酶解产物的电泳图谱特征，根据与正常对照的比对结果来判断待检样品是否存在某个基因突变，其弱点操作繁琐，检出率低，因为并非所有的基因突变都恰好位于某个内切酶的识别区。
4 变性高效液相色谱分析： 此技术是一项在单链构象多态性分析和变性梯度凝胶电泳基础上发展起来的新的杂合双链突变检测技术。它能对大批量PCR扩增产物进行筛查，其在检测大量致病基因的不同序列方面显示出高度的敏感性，适合做快速的基因筛查。目前该技术主要用来检测200~300bp大小的DNA片段，长的DNA片段的检测尚未见报道。
5基因芯片
基因芯片是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，然后与待测的标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交，再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。基因芯片技术因其具有微型化、集约化和标准化的特点，在感染性疾病、遗传性疾病、重症传染病和恶性肿瘤等疾病的临床诊断方面具有独特的优势，可将对应于突变热点的寡核苷酸探针合成点或点加于DNA芯开发者_开发百科片上，通过一次杂交完成对待测样品多种突变可能性的筛查，实现对疾病的高效快速诊断。
基因检测芯片技术具有高效率、高通量等特点，由博奥生物和301医院联合推出的耳聋检测基因芯片已经在国内率先取得国家食品药品监督管理局医疗器械证书，将有助于改变我国许多地区遗传性耳聋缺乏早期诊断的状况。可以提供从孕前、产前到出生的基因检测，帮助生育父母及时获知新生命的遗传信息并采取措施，降低新生儿患遗传性耳聋的概率。
重点介绍下第六种
6第六种耳聋基因检测方法——飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）
质谱方法检测基因是首先进行PCR扩增目的片断区域，然后加入多对特异性引物，进行单碱基延伸，再将单碱基延伸产物纯化后打质谱，根据不同引物扩增产物的质荷比不同，判断有无碱基突变。
详见：http://blog.sciencenet.cn/blog-623020-483407.html
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