测序技术用于复杂疾病研究有什么缺陷？如何改进？？

juventusforever 2022-05-13 04:01

现在进行复杂疾病研究最常用的测序方法是全基因组测序或全外显子测序后进行关联研究，这方面的研究失败率还是比较高的，究其原因，就在于二代测序带来的误差，使我们很难检测到罕见变异，而罕见变异才是在复杂疾病中发挥重要作用的关键所在，很多疾病是由于多种罕见突变同时出现才引发的。比如，有研究人员对几千个人的外显子组进行测序和分析后推断，大多数单核苷酸变异是罕见的，在样本群体中的发生率要小于0.5%。
然后，现在的DNA测序技术对于检测罕见突变的能力，要受到样本制备、测序和分析步骤中引入误差的限制。这种误差导致有大于1%的碱基是错误识别的，这种误差率对于复杂疾病尤其是癌症研究将是个决定性的障碍。
目前要降低误差率的方法有以下两种：
一是进行双重测序，通过对DNA双链的两条链进行分别标记和测序，这种方法能将误差率降为每十亿个核苷酸序列中仅有一个人为突变，因此对检测罕见DNA变异和进行单分子计数有很高的灵敏度，可以精确地确定DNA或RNA拷贝数的绝对值；
二是在提取DNA时加入金属螯合剂来降低DNA提取过程中的氧化导致测序结果的偏差，这样能够帮助提高测序结果的精确度，测序过程都要用到的聚合酶往往也有一定的错误率，如果可以开发出一种较低错误率的聚合酶，对于提高测序结果精确度也将十分有帮助；
此外，还有一种方法是进行单细胞测序，他可以帮助发现肿瘤中的特定突变，这种突变有可能会导致此类肿瘤对某一种药物不敏感，即帮助发开发者_JAVA百科现耐药性的罕见突变。

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