基因表达水平检测需要注意什么问题？各种技术的优缺点是什么？？
兵兵兵兵掉水雷
开发者_如何学Python
2021-06-18 16:57
我说一下我知道的部分。荧光定量PCR需要采用具有5‘-3’外切酶活性的Taq酶扩增，合成一对普通引物和一条荧光双标记的Taq-Man探针。要准确体现表达水平，半定量RT-PCR, 荧光定量PCR扩增的循环数比常规少，扩增产物一般都要求处在线性区，如果扩增过程已到达平台区，扩增产物就不能反映基因拷贝数的高低。
指挥家 2021-06-18 17:09
在检测基因表达上qPCR应该比Northern blot更加灵敏，定量上也更准确，而且Northern blot在操作中比qPCR更容易被RNase污染。开发者_开发知识库Northern blot用RNA上样，中间可能涉及RNA提取，放置降解，等量上样等问题，持续时间长，是传统的方法。qPCR不用调模板浓度，根据管家基因归一化，荧光检测，快速。为保证结果正确，需一定的重复次数。
我说一下我知道的部分。荧光定量PCR需要采用具有5‘-3’外切酶活性的Taq酶扩增，合成一对普通引物和一条荧光双标记的Taq-Man探针。要准确体现表达水平，半定量RT-PCR, 荧光定量PCR扩增的循环数比常规少，扩增产物一般都要求处在线性区，如果扩增过程已到达平台区，扩增产物就不能反映基因拷贝数的高低。
指挥家 2021-06-18 17:09
在检测基因表达上qPCR应该比Northern blot更加灵敏，定量上也更准确，而且Northern blot在操作中比qPCR更容易被RNase污染。开发者_开发知识库Northern blot用RNA上样，中间可能涉及RNA提取，放置降解，等量上样等问题，持续时间长，是传统的方法。qPCR不用调模板浓度，根据管家基因归一化，荧光检测，快速。为保证结果正确，需一定的重复次数。
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