基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些？？
_CFT****20906
2021-06-29 05:22
开发者_开发问答
cDNA文库，楼上都提到了，我就不说了，基本上就是PCR手段了。还有一些像是鸟枪法这个也用的很多。最最简单的就是直接分离了~
_WeCh****976714 2021-06-29 05:29 开发者_如何学Go
楼主说的主要是针对已知序列的基因如何获取，如果是针对针对序列未知的基因，最常用的方法是构建一个基因文库或者是cDNA文库，从中筛选出目的基因再进行克隆来得到。
构建基因文库的话，就要先把染色体DNA片段化，再选择合适的噬菌体做载体，之后将片段化的DNA与载体进行连接并包装外壳蛋白，最后用得到的重组噬菌体去感染大肠杆菌，得到的溶菌产物即为基因文库。得到的文库后期还需要进行鉴定，以便需要时可随时进行扩增。
如果是构建cDNA文库，则需要先将mRNA逆转录生成cDNA，然后再进行片段化，它和基因文库的唯一区别就是DNA来源不同，拿到DNA后的构建步骤基本一致。
离别之前的痛苦 2021-06-29 05:30
我们所说的基因，是指mRNA，将mRNA反转录之后，得到RNA-DNA杂合cDNA双链，想得到基因，那就设计引物，从cDNA中PCR获得基因片段。
如果知识片段序列，那就直接设计引物，PCR拉出全长开发者_如何学C就可。
人工合成的话，成本太高，一般是想设计一段序列，用于以后的实验。
qkoufu510 2021-06-29 05:31 开发者_开发技巧
补充一楼二楼的吧。目前获取预测基因序列的方式非常多样的。除了上面说的构建cDNA文库，还有通过转录组测序这也是一种很好的办法。方法就是提取合格的样品，然后进行测序和拼接，不过一般得到了就是unigene或者contigs，还需要按照一楼的方法进行克隆。还有就是假如你研究的某个树种的基因已经得到测序了，那么直接在数据库里搜集就可以的。
cDNA文库，楼上都提到了，我就不说了，基本上就是PCR手段了。还有一些像是鸟枪法这个也用的很多。最最简单的就是直接分离了~
_WeCh****976714 2021-06-29 05:29 开发者_如何学Go
楼主说的主要是针对已知序列的基因如何获取，如果是针对针对序列未知的基因，最常用的方法是构建一个基因文库或者是cDNA文库，从中筛选出目的基因再进行克隆来得到。
构建基因文库的话，就要先把染色体DNA片段化，再选择合适的噬菌体做载体，之后将片段化的DNA与载体进行连接并包装外壳蛋白，最后用得到的重组噬菌体去感染大肠杆菌，得到的溶菌产物即为基因文库。得到的文库后期还需要进行鉴定，以便需要时可随时进行扩增。
如果是构建cDNA文库，则需要先将mRNA逆转录生成cDNA，然后再进行片段化，它和基因文库的唯一区别就是DNA来源不同，拿到DNA后的构建步骤基本一致。
离别之前的痛苦 2021-06-29 05:30
我们所说的基因，是指mRNA，将mRNA反转录之后，得到RNA-DNA杂合cDNA双链，想得到基因，那就设计引物，从cDNA中PCR获得基因片段。
如果知识片段序列，那就直接设计引物，PCR拉出全长开发者_如何学C就可。
人工合成的话，成本太高，一般是想设计一段序列，用于以后的实验。
qkoufu510 2021-06-29 05:31 开发者_开发技巧
补充一楼二楼的吧。目前获取预测基因序列的方式非常多样的。除了上面说的构建cDNA文库，还有通过转录组测序这也是一种很好的办法。方法就是提取合格的样品，然后进行测序和拼接，不过一般得到了就是unigene或者contigs，还需要按照一楼的方法进行克隆。还有就是假如你研究的某个树种的基因已经得到测序了，那么直接在数据库里搜集就可以的。
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